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中华肝脏病杂志，2000年第8卷第4期，243 |
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XTT-PMS法检测肝癌细胞的生长与药物敏感性 |
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唐毅 刘建伟 李斯明 沈雁 钟灿灿 |
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| 材料与方法 1. 主要试剂：MTT、XTT、PMS、DMSO（Sigma公司产品)，RPMI 1640（Gibco公司），氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司），注射用盐酸阿霉素（深圳万乐药业有限公司)，注射用丝裂霉素Ｃ（协和发酵工业株式会社），新生小牛血清（杭州四季青公司提供）。 2. 细胞与细胞培养：人肝癌细胞系 BEL-7402置含10%新生小牛血清的RPMI 1640培养液中，于37℃、5% CO2的培养箱中培养。每两天换液一次，细胞汇合后，胰酶消化，传代。 3. MTT比色分析法：MTT的配制：以PBS配制成5mg/ml贮存液，0.22μm滤膜过滤除菌，4℃避光可以保存一周，使用时以无血清培养液稀释成1mg/ml。 肝癌细胞药敏性测定：先以100μl/孔接种细胞（细胞浓度为104/ml），培养24h后，加入100μl/孔的相应药物，再培养6d后，以50μl/孔加入MTT（1mg/ml)，继续培养4h，弃上清液，加入150μl/孔的DMSO，振荡，待甲簪完全溶解后，以570nm的波长测定光密度(A）值。结果以测定值减背景（本底）值表示。 4. XTT比色分析法：XTT的配制：以无血清培养液配制成1mg/ml，0.22μm滤膜过滤除菌，现配现用。 PMS的配制：以PBS配制成5～100mmol/L的贮存液，0.22μm滤膜过滤除菌，4℃避光保存，一般不超过一个月。XTT-PMS使用液：在新配制的XTT（1mg/ml）加入一定量的PMS即可，立即使用。XTT测定方法：接种肝癌细胞于96孔培养板培养，加入50μl/孔的XTT-PMS使用液，继续培养一定时间后，振荡，以450nm的波长测定吸光度（A）值。XTT测定肝癌细胞药敏性操作大体同上。 5. 数据资料用SPSS 8.0软件分析。 结果 1. PMS对XTT-PMS测定的影响：以103细胞每孔接种96孔培养板，培养7d，分别行MTT、XTT-PMS法测定。在无PMS的条件下，肝癌细胞代谢XTT的能力很差，PMS能显著地促进肝癌细胞代谢XTT，PMS浓度为5μmol/L，培养2h后，XTT-PMS法测定的A值达0.66± 0.07，与常规MTT法测定结果(A 值为0.64±0.03）相似。随着PMS浓度增大或培养时间的延长，A值随着增高，但XTT-PMS所形成的本底值即背景值也随之增大。 2. XTT-PMS测定肝癌细胞数的范围：培养时间为4h、PMS浓度为5μmol/L时，XTT-PMS 法测定的A 值明显高于MTT法，其测定的肝癌细胞数范围为102～6×104，而MTT法测定的范围为104～6×104。 3. 肝癌细胞药敏性测定结果：XTT-PMS（培养时间为4h、PMS浓度为5μmol/L)及常规MTT法测定肝癌细胞药敏性的结果见表1，IC50表示肝癌细胞50%抑制率时药物浓度，两种方法测定的结果基本相同。 表1 MTT、XTT-PMS法测定的IC50值
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